Allgemeinheit
Immunofixation ist ein Labortest, der die Identifizierung und Typisierung von Gammaglobulinen in einer biologischen Probe ermöglicht.
Im Detail erlaubt die Analyse, die Immunglobulinklassen (IgA, IgG, IgM, IgE oder IgD) und die Art des Kappa- oder Lambda- Typs der leichten Kette im Blut oder im Urin des Patienten entsprechend ihrer spezifischen elektrophoretischen Mobilität zu untersuchen . Zur Identifizierung, um welches Gammaglobulin es sich handelt, werden anschließend bei der Immunfixierung spezifische Antigene für das Fragment oder den entsprechenden Antikörper ( Anti-Immunglobulin-Antiseren ) inokuliert: Das Vorliegen der vermuteten Veränderung wird durch die Bildung bestätigt eines Niederschlags, mit bloßem Auge oder Mikroskop sichtbar.
Diese Informationen sind insbesondere für die Diagnose von Plasmazellpathologien (Gammopathien oder Plasmazelldyskrasien) von großer Bedeutung. Die Immunofixierung ist sehr nützlich für die Beurteilung und Überwachung des multiplen Myeloms, der Waldenström-Makroglobulinämie und der primären Amyloidose (auch Leichtketten-Amyloidose genannt).
Was
Immunofixation (oder Immunelektrophorese, auch im Akronym IFE abgekürzt) ist eine Technik, mit der bestimmt werden kann, ob und welche Immunglobulinklasse (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) oder welche Art von Kappa oder Lambda der leichten Kette vorliegt Überschuss oder Defekt im Blutserum und Urin des Patienten.
Die leichten Ketten von Kappa und Lambda charakterisieren die monoklonale Komponente, dh die Antikörper mit der gleichen identischen chemischen Struktur.
Serum- und Urin-Immunfixierung: Wann ist dies angezeigt?
Plasmazelluläre Dysplasien oder Gammopathien sind eine heterogene Gruppe von Erkrankungen mit unbekannter Ätiologie, die gekennzeichnet sind durch:
- Überproportionale Proliferation eines B-Zellklons ;
- Vorhandensein eines Immunglobulintyps (oder seiner Polypeptiduntereinheit) im Serum und / oder Urin, strukturell und elektrophoretisch homogen ( monoklonal ).
Normalerweise werden Plasmazell-Dyskrasien durch Elektrophorese von Serum- und Harnproteinen diagnostiziert, gefolgt von einer Serum-Immunfixation (IFE).
Gleichzeitig kann ein Bluttest zur Messung der Gesamtkonzentration von Immunglobulinen (IgG + IgM + IgA) verschrieben werden.
Weitere Informationen: Immunglobuline - Was sie sind, wie sie gemessen werden und Referenzwerte »Immunfixierung: Grundprinzip
Die Immunofixierung ist eine Untersuchung, die zwei Phasen umfasst (zuerst die Elektrophorese in Agarosegel, dann die Immunpräzipitation mit spezifischen Antiseren ).
Der erste Schritt der Immunfixierung ist derselbe wie der der ELEKTROPHORESE von Proteinen (oder Protidogrammen), daher ist es notwendig, sich an ein Konzept zu erinnern:
- Bei der Elektrophorese handelt es sich um eine Laboranalyse, mit der die Menge der im Blutserum oder in anderen biologischen Proben vorhandenen Proteine bestimmt werden kann und für jede Fraktion festgestellt werden kann, ob Qualitätsanomalien vorliegen. Insbesondere ermöglicht diese Prüfung die Unterteilung von Proteinen in fünf Gruppen: Albumin, Alpha-1-Globulin, Alpha-2-Globulin, Beta-Globulin und Gamma-Globulin ; Letztere werden mit Immunfixierung genauer untersucht.
- Die Elektrophorese ist eine Trennmethode, die auf der unterschiedlichen Migrationsgeschwindigkeit elektrisch geladener Partikel durch eine Lösung und ein inertes Trägermedium unter dem Einfluss eines durch Gleichstrom erzeugten elektrischen Feldes basiert. In der Praxis werden bei der Untersuchung die elektrische Ladung und die Molekülmasse der in der Patientenprobe enthaltenen Proteine ausgenutzt. Unter dem Impuls eines elektrischen Feldes wandern diese Makromoleküle und "gruppieren" sich nach Typ, wobei sie in charakteristischer Weise auf Stress reagieren. Das Ergebnis ( Electrophoretic Tracing ) besteht aus verschiedenen Peaks und Kurven, denen die Proteinfraktionen entsprechen. Normalerweise ist der erste Peak, der höher und schmaler ist, der von Albumin ; Um zu folgen, beobachten wir die Globulin- Peaks, die viel niedriger sind als Albumin. Die Zunahme oder Abnahme der Amplitude und Intensität der Peaks, die sich auf dem Weg bilden, deuten auf ein mehr oder weniger starkes Vorhandensein von Proteinen in jeder Kategorie hin. Je mehr Proteine in einer Bande vorhanden sind, desto höher ist der jeweilige Peak. Wenn man bei Gammaglobulinen die Menge der verschiedenen Klassen (IgA, IgM, IgG usw.) kennen will, muss man auf eine Einzeldosis zurückgreifen. Im Allgemeinen ist der jeweilige Peak umso höher, je mehr Gammaglobuline in einer Bande vorhanden sind; Die Höhe entspricht der Gesamtmenge an Proteinen, die zu einer bestimmten Kategorie gehören.
IMMUNOFISSATION bietet:
1) Agarose-Gel-Elektrophorese : Die Patientenprobe (Serum oder Urin) wird auf einem elektrophoretischen Streifen, dh dem Träger für die Migration (normalerweise Agarose-Gel), abgelegt. Durch Anlegen eines durch Gleichstrom erzeugten elektrischen Feldes wird eine Trennung in verschiedene Bänder erreicht. In der Praxis wandert jede Art von Gammaglobulin, die in der Mischung (dh in der Patientenprobe) vorhanden ist, basierend auf der Molekularmasse und der elektrischen Ladung. Die unterschiedliche elektrophoretische Mobilität von Gammaglobulinen ermöglicht es, sie zu identifizieren (jedes von ihnen fällt mit einer bestimmten Bande auf dem elektrophoretischen Weg zusammen) und etwaige Anomalien zu beobachten.
2) Immunpräzipitation mit spezifischen Antiseren (Fixierung) : Spezifische Antigene für einen spezifischen Antikörper oder ein spezifisches Fragment werden jedem elektrophoretischen Streifen einzeln zugesetzt (Anti-IgG, Anti-IgA, Anti-IgM, Anti-Light-Kappa oder Anti-Chain). leichte Lambda-Kette). Wenn ein monoklonales Protein vorhanden ist, erzeugt die Wechselwirkung des Antigens mit dem entsprechenden Antikörper eine schmale Bande (dies bedeutet, dass das Ergebnis positiv ist) und die Bildung eines Niederschlags, der mit bloßem Auge oder Mikroskop sichtbar ist. Schließlich wird die Probe verarbeitet (dh gewaschen und gefärbt), um nicht ausgefällte Proteine zu entfernen, um die Trocknung des Gels zu erhalten und mit dem Ablesen der Ergebnisse fortzufahren.
Warum es läuft
Was ist Immunfixation?
Die Immunfixierung im Serum ist eine Untersuchung zur Diagnose oder Überwachung von Krankheiten, die durch eine Veränderung der Gammaglobuline gekennzeichnet sind, insbesondere wenn es um die Produktion der monoklonalen Komponente ( monoklonale Gammopathie ) geht.
Weitere Informationen: Monoklonale Gammopathien - Was und welche sind »Die Immunofixierung ist bei Verdacht auf Plasmazelldyskrasie nützlich und für die Untersuchung von MIELOMA (und verwandten Pathologien) und MGUS (ein Akronym für "monoklonale Gammopathien von ungewisser Bedeutung") von grundlegender Bedeutung.
Mit diesem Test können wir auch die Makroglobulinämie und die Amyloidose der leichten Kette ( AL ) von Waldenström bewerten.
Immunfixation: Wann ist die Untersuchung vorgeschrieben?
Die Indikation zur Immunfixierung folgt auf klinische oder labortechnische Nachweise, die den Verdacht auf Veränderungen von monoklonalen Antikörpern oder Immunglobulinen im Serum oder Urin erwecken .
Diese Untersuchung ermöglicht es beispielsweise, das Ergebnis einer seroprotektiven Elektrophorese oder einer Urinelektrophorese zu vertiefen: Wenn bei der elektrophoretischen Verfolgung die Banden, die den Gammaglobulinen entsprechen, von der Normalität abweichen, identifiziert die Immunfixierung, welches dieser Proteine quantitativ verändert ist und Qualität.
Zusammenfassend kann die Immunfixierung im Serum verschrieben werden:
- In dem Fall, in dem andere Labortests ein abnormales Ergebnis liefern, in Bezug auf die Abwesenheit oder eine kleinere und größere Menge von Plasmaproteinen in Bezug auf die Norm;
- Wenn das Vorhandensein von Krankheiten vermutet wird, die durch die Produktion einer monoklonalen Komponente gekennzeichnet sind, wie z.
- Multiples Myelom und seine Varianten;
- Waldenström-Makroglobulinämie;
- Amyloidose;
- Wenn der Patient Symptome und Anzeichen entwickelt, die auf das Vorliegen einer monoklonalen Gammopathie oder eines multiplen Myeloms hindeuten, wie z.
- Knochenschmerzen;
- Anämie;
- Leichte Müdigkeit;
- Wiederkehrende Infektionen;
- Unerklärte Frakturen.
Im Falle des multiplen Myeloms sind die Elektrophorese von Proteinen und die Immunfixierung von erheblichem Nutzen, um auch das Fortschreiten der Krankheit zu überwachen (Follow-up).
Immunofixierung: an welchen Proben kann gearbeitet werden?
Die biologischen Proben, die einer Immunfixierung unterzogen werden können, sind hauptsächlich:
- Serum (Serum-Immunfixierung);
- Urin (Harnimmunfixierung);
- Liquor * (Liquor Immunofixation).
* Hinweis : Liquor oder Liquor cerebrospinalis ist die Flüssigkeit, die das Gehirn, das Rückenmark, die Hirnnerven und die Wirbelsäulenwurzeln durchdringt und schützt.
Normale Werte
Ein negatives Ergebnis der Immunfixierung von Serum und Urin auf monoklonale oder polyklonale Gammaglobuline gilt als NORMAL .
Gammaglobuline
Gammaglobuline machen 9-20% der gesamten Plasmaproteine aus.
- Referenzwert Gammaglobulin : 0, 9-1, 4 g / dl
In Bezug auf die Gesamtkonzentration von Immunglobulinen ( IgG + IgM + IgA ) wird angenommen, dass Werte zwischen 600 und 2300 mg / dl normal sind.
- Referenzwert Immunogobuline im Serum :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Hinweis : Das Referenzintervall der Untersuchung kann je nach Alter, Geschlecht und Instrumentierung im Analyselabor geringfügig variieren. Aus diesem Grund ist es vorzuziehen, die direkt im Bericht aufgeführten Bereiche zu konsultieren. Es sollte auch daran erinnert werden, dass die Ergebnisse der Analysen als Ganzes vom Allgemeinarzt beurteilt werden müssen, der die Krankengeschichte des Patienten kennt.
Hohe Werte - Ursachen
Die Zunahme von Gammaglobulinen kann sein:
- Polyklonal, wenn die Produktion von Immunglobulinen heterogen ist, dh alle Bestandteile der Gammaglobuline - die aus verschiedenen Plasmazellen hergestellt oder stammen - sind von der Zunahme betroffen;
- Monoklonal, wenn die Gammaglobuline von einem einzigen Typ (Klon) von Plasmazellen produziert oder abgeleitet werden.
Die Zunahme der polyklonalen Gammaglobuline kann mit Folgendem zusammenhängen:
- Chronisch entzündliche Erkrankungen;
- Rheumatoide Arthritis;
- Systemischer Lupus erythematodes;
- Chronische Lebererkrankungen (wie Hepatitis und Leberzirrhose);
- Akute und chronische Infektionen;
- Jüngste Impfungen;
- Einige Tumorerkrankungen.
Hohe Werte von monoklonalen Gammaglobulinen können stattdessen auf Folgendes hinweisen:
- Einige Neubildungen und chronische Entzündungen;
- Multiples Myelom;
- Lymphom;
- Waldenström-Makroglobulinämie.
Ein Überschuss an Gammaglobulin wird als Hypergammaglobulinämie bezeichnet, während ein Mangel als Hypogammaglobulinämie bezeichnet wird .
Niedrige Werte - Ursachen
Die Reduktion von Gammaglobulinen kann auf das Vorhandensein verschiedener Krankheiten des Immunsystems auf genetischer Basis hinweisen, einschließlich Agammaglobulinämie oder einer sekundären Immunschwäche (z. B. AIDS, Nierenversagen, akute Sepsis und Cushing-Syndrom).
Die Abnahme der Gammaglobulinwerte kann auch von der Verwendung von Zytostatika, Immunsuppressiva und Steroiden abhängen.
Wie es durchgeführt wird
Serum-Immunfixierung
Die Immunfixierung im Serum umfasst eine einfache Blutentnahme aus der Vene eines Arms. Das Serum wird durch Zentrifugation der biologischen Probe erhalten; Dies ermöglicht es in der Tat, die Fraktion, die die Zellen (den korpuskulären Teil) enthält, von der flüssigen Fraktion des Blutes (Plasma) zu trennen. Das Blutserum ist frei von Gerinnungsfaktoren (Fibrinogen, Faktor VIII, Faktor V und Prothrombin).
Harnimmunfixation
Zur Durchführung der Immunfixierung im Urin muss eine kleine Menge Urin in einem speziellen sterilen Behälter gesammelt werden. Basierend auf den Anweisungen des Arztes und des Labors kann die Probe ohne genauen Zeitpunkt ( zufällig ) oder innerhalb von 24 Stunden entnommen werden.
Immunfixierung des Liquors
Die Analyse erfordert die Aufnahme einer kleinen Menge Cerebrospinalflüssigkeit durch Einführen einer Nadel in die Wirbelsäulenhöhle ( Lumbalpunktion ).
Vorbereitung
Immunfixation: Wie bereiten Sie sich auf die Prüfung vor?
- Vor der Blutentnahme müssen Sie in einigen Labors möglicherweise mindestens 10-12 Stunden fasten. Während dieser Zeit ist eine kleine Menge Wasser erlaubt.
- Die Immunfixierung kann an Urin durchgeführt werden, der zu einer bestimmten Tageszeit (zufällig) oder innerhalb von 24 Stunden entnommen wurde. Daher ist es erforderlich, zuvor die entsprechenden sterilen Behälter zu beschaffen.
- Hinsichtlich der Immunfixierung der Flotte ist stattdessen keine besondere Vorbereitung erforderlich.
Was kann das Ergebnis der Prüfung verändern?
Einige Arzneimittel können das Ergebnis der Immunfixierung beeinflussen. Es ist daher ratsam, laufende Arzneimitteltherapien dem Arzt mitzuteilen.
In den sechs Monaten vor der Untersuchung können die Verabreichung von Impfstoffen (Immunisierung) und der Gebrauch von Arzneimitteln wie Phenytoin, Procainamid, oralen Kontrazeptiva, Methadon und therapeutischem Gammaglobulin die Konzentration von Immunglobulinen erhöhen. Andere Arzneimittel, die das Testergebnis verändern können, sind Corticosteroide, Neomycin, Acetylsalicylsäure und Chlorpromazin.
Interpretation der Ergebnisse
Das Ergebnis der Immunfixierung wird in Kombination mit dem Ergebnis anderer Analysen ausgewertet. Die Interpretation des Befundes liegt in der Verantwortung des Allgemeinarztes oder des Referenzarztes, der die Veränderungen, die ein bestimmtes Gammaglobulin betreffen (z. B. die Bande, die mit den Immunglobulinen G zusammenfällt), identifizieren und mit bestimmten Krankheiten vergleichen kann. Diese Bewertung bestätigt oder stützt die diagnostische Hypothese: Im Allgemeinen kann die Immunfixierung ein normales Gammaglobulinprofil aufzeigen oder ein monoklonales Protein oder ein polyklonales Modell identifizieren.
Sobald die Krankheit definiert ist, kann die Immunfixierung durchgeführt werden für:
- Überwachen Sie die Krankheit über einen längeren Zeitraum und verfolgen Sie dann ihren Verlauf (Follow-up).
- Überprüfen Sie die Wirksamkeit des Therapieprotokolls .
Vor- und Nachteile der Immunfixierung
Im Vergleich zur Proteinelektrophorese ist die Immunfixierung:
- Es ist schneller : Die Ergebnisse der Immunisierung werden normalerweise innerhalb von drei Stunden erhalten;
- Es ist empfindlicher (wenn auch geringfügig): Durch Immunfixierung kann ein Immunglobulin nachgewiesen werden, das von der Proteinelektrophorese ausgeschlossen ist, insbesondere bei niedrigen Konzentrationen (weniger als 1 Gramm / Liter).
Darüber hinaus ist die Immunfixierung:
- Es kann teilweise automatisiert werden ;
- Es ist leicht lesbar und interpretierbar .
Die Immunfixierung ist jedoch teurer als die Proteinelektrophorese und erlaubt nur eine Gammaglobulinanalyse .
Normales Ergebnis
Bei der Immunfixierung umfasst ein normaler Weg:
- Eine Bande, die mit dem dunkleren Immunglobulin G ( IgG ) übereinstimmt;
- Eine Bande, die dem leichtesten Immunglobulin A ( IgA ) entspricht;
- Das Fehlen der Bande für Immunglobulin M ( IgM );
- Das Kappaband ist mit einem Verhältnis von 2: 1 dichter als das von Lambda (leichte Kette).
Bei einem normalen Ergebnis sind die Banden groß und die Farbdichte nimmt zu den Rändern des Immunelektrophoresestreifens hin allmählich und gleichmäßig ab.
Polyklonale Gammaglobuline
In einigen Fällen sind alle Immunfixationsbanden im gleichen Ausmaß gleichmäßig verdeckt. Dieses Modell repräsentiert das Vorhandensein polyklonaler Immunglobuline . Auch in diesem Fall sind die Banden breit und der Übergang zu den Rändern des immunelektrophoretischen Streifens ist allmählich. Die normalerweise fehlende IgM-Bande ist breit.
Monoklonale Gammaglobine
Wenn ein schmales Band mit scharfen Kanten auf dem Weg der Immunfixierung identifiziert werden kann, bedeutet dies, dass die Suche nach monoklonalen Komponenten positiv ist .
Die Identifizierung eines monoklonalen Immunglobulins ist bei der Diagnose der folgenden Zustände nützlich:
- Monoklonale Gammopathie von unbestimmter Bedeutung (MGUS);
- Multiples Myelom;
- Waldenstrom-Makroglobulinämie;
- Amyloidose.
Darüber hinaus kann die Immunfixierung zur Überwachung der Therapie bei Plasmazelldyskrasien (dh multiplem Myelom und Waldenstrom-Makroglobulinämie) eingesetzt werden. Wenn der Spiegel an monoklonalem Protein nach der Chemotherapie abnimmt oder nicht nachweisbar ist, kann dies auf ein Ansprechen auf die Behandlung hinweisen. Im Gegensatz dazu ist ein trotz Behandlung persistierendes monoklonales Protein ein Zeichen einer refraktären Erkrankung .
Bitte beachten Sie . Ein negatives Immunfixationsergebnis schließt eine Plasmazelldyskrasie nicht immer aus. Beispielsweise kann ein nicht-sekretorisches Multiples Myelom oder Oligosekretorium sowohl im Urin als auch im Serum negative Ergebnisse liefern. Wenn der diagnostische Verdacht auf Gammopathie weiterhin hoch ist, ist daher die Bestimmung des Verhältnisses der Kappa / Lambda Libere Light Chains ( K / L-Verhältnis ) angezeigt.
Immunofixation und Diagnose von Multipler Sklerose
Die Immunfixierung von Liquor cerebrospinalis wird verschrieben, wenn der Verdacht auf Multiple Sklerose besteht . In diesem Fall ist der ermittelte Weg charakteristisch, da er das Vorhandensein der sogenannten oligoklonalen Banden hervorhebt. Das Ergebnis wird im Laborbericht als positiv ausgewiesen . Es sollte berücksichtigt werden, dass die Banden normalerweise nicht bei der Immunfixierung im Serum beobachtet werden, da sie mit der Produktion von intrathekalen Gammaglobulinen korrelieren.
Es ist jedoch zu beachten, dass dieser Befund die Diagnose nicht unbedingt bestätigt, da bei oligoklonalen Banden im Liquor cerebrospinalis andere Zustände auftreten können.
Mit anderen Worten, die Identifizierung oligoklonaler Banden mit Liquor-Immunfixation ist sehr nützlich, um die Diagnose von Multipler Sklerose zu unterstützen, muss jedoch durch andere Untersuchungen bestätigt werden. Andere Zustände, die dieses Ergebnis liefern können, sind Entzündungen des Zentralnervensystems, einschließlich HIV-bedingter Enzephalitis, Neurosyphilis, Neurosarkoidose, Lyme-Meningoenzephalitis, malignen ZNS-Erkrankungen, Optikusneuromyelitis und transversaler Myelitis.
