Test Orac (Sauerstoffradikalabsorptionskapazität)
Der ORAC-Test ist die Methode, die seit kurzem als Referenzmethode für die Messung der antioxidativen Wirkung von Nahrungsmitteln und Nahrungsergänzungsmitteln gilt.
Der Test basiert auf der Fähigkeit eines Antioxidans, den oxidativen Abbau eines fluoreszierenden Moleküls durch Peroxylradikale (ROO •) zu hemmen. Die am häufigsten verwendeten fluoreszierenden Substanzen sind Beta-Phycoerythrin, Fluorescein und Pyrogallol, die sich in Stabilität und Reaktivität unterscheiden. Die Peroxyradikale, die durch thermische Zersetzung eines Azocomposed-Initiators (AAPH) erzeugt werden, greifen das fluoreszierende Molekül an und bauen es ab, was zu einem mit einem Fluorometer gemessenen Fluoreszenzverlust führt.
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Ein Antioxidans konkurriert mit dem Substrat, das von dem fluoreszierenden Molekül gebildet wird, das mit den Radikalen reagiert, bevor sie das Molekül selbst schädigen können, wodurch der Fluoreszenzabbauprozess gehemmt wird. Der Unterschied zwischen dem Abfall der Fluoreszenz in Abwesenheit und in Gegenwart des Antioxidansmoleküls ist ein Maß für die Fähigkeit einer Substanz, die Reaktivität freier Radikale zu dämpfen. Die Antioxidanskapazität ORAC wird in ORAC-Einheiten ausgedrückt, die Trolox®-Mikromoläquivalenten pro Gramm Probe entsprechen, wobei Trolox® eine Verbindung mit Antioxidansaktivität ist, die als Referenzstandard gewählt wurde.
Die ORAC-Methode hat sich als Test zur Messung der Antioxidationskraft verbreitet, da sie präzise und wiederholbare Messungen zu akzeptablen Kosten liefert. Darüber hinaus ist es automatisierbar und bei Änderung des Protokolls sowohl auf hydrophile als auch auf lipophile Substanzen anwendbar. Das Verfahren hat jedoch auch seine Grenzen. Der Messmechanismus des ORAC-Tests erlaubt zunächst nur eine quantitative Beurteilung der antioxidativen Wirkung des Moleküls, dh er gibt genau an, wie viele freie Radikale ein Antioxidans deaktivieren kann, gibt jedoch keinen Hinweis auf die Geschwindigkeit, mit der dies geschieht. Die Geschwindigkeit der Inaktivierung freier Radikale ist ein wichtiger Parameter, um die Wirksamkeit eines Antioxidans festzustellen. Denn je schneller die Radikale reagieren, desto geringer ist die Wahrscheinlichkeit, dass sie biologische Strukturen angreifen und Schäden verursachen.
Darüber hinaus kann der ORAC-Wert eines Antioxidans abhängig vom verwendeten Analyseprotokoll stark variieren. Neben der Extraktionsmethode und der Temperatur, bei der die Analyse durchgeführt wird, ist die Wahl der fluoreszierenden Sonde für die Bestimmung des Endergebnisses von großer Bedeutung, so dass Messungen mit unterschiedlichen fluoreszierenden Molekülen zumeist nicht vergleichbar sind. Vor dem Vergleich der Ergebnisse der ORAC-Antioxidationskapazität verschiedener Substanzen ist es daher wichtig, das Protokoll zu kennen, da die Werte nur mit demselben Analyseprotokoll vergleichbar sind.
Die Verbreitung dieser Methode hat es uns jedoch ermöglicht, die ORAC-Kapazität vieler Lebensmittel, insbesondere Obst und Gemüse, durch die Erstellung von Referenztabellen zu bestimmen, die weit verbreitet sind und im Ernährungsbereich verwendet werden. In diesem Zusammenhang schlägt das amerikanische Landwirtschaftsministerium vor, täglich etwa 5.000 ORAC-Einheiten zu sich zu nehmen, die durch den Verzehr von etwa fünf Portionen Obst und Gemüse erhältlich sind, um der Aktivität freier Radikale wirksam entgegenzuwirken.
Es ist interessant festzustellen, dass die Liste der Antioxidationskräfte verschiedener Lebensmittel gemäß der ORAC-Skala, die bis 2010 aktualisiert wurde, von der USDA-Website gestrichen wurde. In einem Vermerk begründet die Abteilung diese Wahl mit 1) dem Mangel an klinischen Daten zur Untermauerung der tatsächlichen in vivo Übertragbarkeit der in vitro durchgeführten Antioxidantientests; 2) das Fehlen ausreichender Beweise, um zu glauben, dass die vorteilhaften Wirkungen von Lebensmitteln, die reich an Polyphenolen sind, auf ihre antioxidativen Eigenschaften zurückgeführt werden können. Heute wissen wir, dass antioxidative Moleküle in Lebensmitteln eine Vielzahl von Funktionen haben, von denen viele der Fähigkeit, freie Radikale zu absorbieren, fremd sind. Ihre wohltuende Wirkung auf die Gesundheit scheint daher auf von der antioxidativen Kraft unabhängigen Wirkmechanismen zu beruhen.
