Essay ABTS
Es ist eine analytische Methode, die eine spektrophotometrische Messung verwendet, um die Antioxidanskapazität einer Probe zu bestimmen. Mit einem UV-Vis-Spektrophotometer wird die Extinktion einer Lösung mit dem Radikal ABTS • + gemessen, die durch Oxidation des ABST (2, 2'-Azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonat), einer farblosen Substanz in Form, erzeugt wird Radikale werden durch Absorption bei Wellenlängencharakteristika im sichtbaren Bereich gefärbt. Der Zusatz von ABTS • + zu der Lösung von Antioxidansmolekülen, die durch Übertragung von Wasserstoff und einem Elektron wirken können, bestimmt die Reduktion des Radikals in die farblose Form. mit anschließender Verfärbung des Reaktionsgemisches. Dieses Bleichen, proportional zur Menge des vorhandenen Antioxidationsmittels, kann als Abnahme der Extinktion über eine bestimmte Zeit bei einer bestimmten Wellenlänge (734 nm) gemessen werden. Die Antioxidationskraft wird ausgedrückt durch Vergleich mit die Extinktionswerte, die für bekannte Mengen eines Antioxidansmoleküls gemessen wurden, das als Referenzstandard gewählt wurde, in der Regel Ascorbinsäure oder Trolox (in diesem Fall Wir sprechen von TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity Antioxidans Aktivität.
Die Messung der antioxidativen Kraft basierend auf der Verwendung von ABTS hat den Vorteil, einfach und schnell zu sein. Darüber hinaus können sowohl hydrophile als auch lipophile Antioxidantien in einem weiten pH-Bereich gemessen werden. Es muss jedoch berücksichtigt werden, dass das verwendete Radikal (ABTS • +) nicht physiologisch ist und in biologischen Systemen nicht vorhanden ist und dass Probleme der Wiederholbarkeit der Messung aufgrund der Reaktionskinetik der verschiedenen beteiligten Antioxidantien häufig hervorgehoben werden.
FRAP (Eisenreduzierende Antioxidationskraft)
Der FRAP-Test misst die Reduktionsfähigkeit von Antioxidantien gegen Eisenionen. Es ist eine auf Elektronentransfer basierende Methode, bei der Eisenionen von Fe3 + zu Fe2 + wandern. Unter bestimmten pH-Bedingungen (3, 6) und in Gegenwart von TPTZ (2, 4, 6-Tris (2-pyridyl) -s-triazin) bilden diese Ionen Komplexe mit unterschiedlichen Eigenschaften, insbesondere das reduzierte Derivat (Fe² & spplus;) -TPTZ) nimmt eine blaue Farbe mit einer maximalen Absorption bei 593 nm an, die spektrophotometrisch gemessen werden kann. Das Reduktionsvermögen einer Antioxidanssubstanz kann daher als Änderung der Extinktion der Lösung, die das Oxidationsmittel enthält, bei der Wellenlänge gemessen werden, die durch Vergleich mit der Abweichung gegenüber einem Standard (z. B. Ascorbinsäure) ermittelt wird.
Der FRAP-Test wurde entwickelt, um die Reduktionskraft des Plasmas zu messen, wurde dann jedoch angepasst, um die Antioxidationskapazität von reinen Verbindungen und komplexen Matrices zu testen. Tatsächlich ist es mit dieser Methode nicht möglich, den Beitrag von Molekülen wie Thiolen und Proteinen zu messen, die eine antioxidative Rolle spielen grundlegend in biologischen Flüssigkeiten (zB Blut). Der Vorteil bei der Verwendung dieser Methode ist, dass es sich um eine der einfachsten, schnellsten und kostengünstigsten Methoden zur Bestimmung der Antioxidationskapazität in vitro handelt.
DPPH-TEST
2, 2-Diphenyl-1-picrilhydrazyl (DPPH •) ist ein sehr stabiles und im Handel erhältliches Stickstoffradikal, das sich durch eine intensive purpurrote Farbe auszeichnet und bei Reduktion in Gegenwart eines Moleküls mit antioxidativer Kapazität stumpf wird. Durch spektrophotometrische Messung der Extinktionsänderung der DPPH-Lösung nach Reaktion mit einer Antioxidans-Verbindung bei 517 nm ist es möglich, die Reduktionskapazität der Testsubstanz zu quantifizieren, unabhängig davon, ob sie auf Wasserstoffübertragung oder Elektronentransfer einwirkt. Das Ergebnis wird im Allgemeinen als IC 50 ausgedrückt, dh die Menge an Antioxidans, die die anfängliche DPPH-Konzentration um 50% reduzieren kann.
Dies ist eine schnelle, einfache und kostengünstige Methode. Die Grenzen dieser Analysetechnik sind durch die Möglichkeit gegeben, dass die Ergebnisse der Analyse verfälscht werden, wenn die zu untersuchenden Moleküle im gleichen Wellenlängenbereich des DPPH-Radikals absorbieren oder wenn große Moleküle vorhanden sind, die sich sterisch zusammenballen und dies nicht tun sie reagieren mit dem reaktiven Teil des Radikals. Dadurch reagiert das DPPH bis zu 1000-mal langsamer mit Antioxidantien als Peroxylradikale.
PCL-TEST (Photochemilumineszenz)
Der PCL-Test basiert auf der Reaktion einer bestimmten Radikalspezies, des durch UV-Strahlung photochemisch erzeugten Superoxidanions (O2 • -), mit einer chemilumineszierenden Verbindung. Der verwendete Marker ist Luminol, ein Molekül, das bei Oxidation durch freie Radikale ein Licht abgibt, das mit einem speziellen Instrument (Photochem®) gemessen werden kann. Das Vorhandensein von Antioxidationsmitteln im Rationsgemisch deaktiviert die Radikalspezies, die die Emission von Chemilumineszenz hemmen. Die PCL-Analyse ist sehr schnell und empfindlich. Darüber hinaus können mit der Anwendung von zwei verschiedenen Analyseprotokollen, ACW (Antioxidant Capacity Water Solutions) und ACL (Antioxidant Capacity Lipid Solutions), die Beiträge zur gesamten Antioxidationskapazität der wasserlöslichen Komponente (Flavonoide, Vitamin E) für dieselbe Verbindung gemessen werden. C, Aminosäuren usw.) als die fettlöslichen (Tocopherole, Tocotrienole, Carotinoide usw.). Die Antioxidationskapazität des untersuchten Produkts wird durch Vergleich der aufgezeichneten Werte mit den Messungen für Standardreferenzmoleküle Ascorbinsäure für das ACL-Protokoll und Trolox für das ACW-Protokoll erhalten.
